[دافئ الإحساس]

وهادا من موقع اخر

......

عزل الـ DNA من دم بشري بطريقة الـ buffy coat
نقوم عند استخلاص الـ DNA من الـ buffy coat بغسل الكريات الحمر وفق لمراحل التالية :
1. نأخذ عينة الدم من الفريزر وتوضع في حمام جاف بحرارة 37 مئوية لمدة 5 دقائق حتى يتم انحلال الكريات الحمراء , نجانس العينة (بالتقليب اللطيف) .
2. نثفل الانبوب لمدة 1 دقيقة .
3. نرمي الطافي ونجفف الانبوب على ورق نشاف مخبري ثم نضيف 1 مل من مركب ACE الحال للكريات الحمر حتى يتم حل الكريات الحمراء بغية التخلص منها , ونخلط لمدة عشر دقائق بالقلب .
4. نثفل الانبوب لمدة دقيقة .
5. نعيد المرحلة ( 3 – 4) من أجل الحصول على رسابة خلايابيضاء نظيفة وخالية من الخلايا الحمراء قدر الامكان ونكرر العملية عند الحاجة .
6. بعد الحصول على رسابة بيضاء نثفل الانبوب للمرة الاخيرة بـ ACE لمدة 1 دقيقة ونرمي الطافي ونجفف على ورق نشاف ثم نضيف 1 مل من PBS للتخلص من آثار ACE .
7. نثفل ا دقيقة ثم نرمي الطافي ونجفف على ورق النشاف .
8. نضيف 180 مل PBS لحل الخلايا .
وبذلك تصبح الـ buffy coat جاهزة لتطبيق البروتوكول المناسب لاستخلص الـ DNA .