تجربتي اليوم (Workshop) على جهاز الـ pcr+ شرح بسيط

[ولد 02 مكة]

بسم الله الرحمن الرحيم



السلام عليكم ورحمة الله وبركاته

هدا اول (workshop) ليا والحمد لله كان جدا ممتع ومفيد و حاب اني اشارك معاكم معلوماتي (الفكرة العامة لعمل الجهاز) للفائدة العامة
واتمنى التصحيح اذا اخطأت.

جهاز الـ(PCR):-
طبعا هوة اختصار لكلمة (Polymerase Chain Reaction) هذ الجهاز تقنية معملية تقوم بعمل نسخ متكررة من جزئ معين من الـ(DNA) لدراستها بختصار مثل (الطابعة لعمل نسخ) ويعتمد بشكل اساسي على الحرارة وبعض الانزيمات ساذكرها لاحقا. ويجب عمل خطوات قبل العمل على الجهاز:ـ

اولا تحضير العينة:ـ
استخلاص الـ(DNA):ـ
استخلاص المادة الوراثية يكون لدراسة التسلسل الجزيئي للمادة،و لدراسة جين معين للابحاث ،او الطفرات أو غيره ....

راح اتكلم بصورة عامة طبعا الـ(DNA) هوا اغلى ما يملكه جسم الانسان وجميعنا نعلم انه يتواجد داخل النواة محاط بعضيات وجميعها محاطة بغشاء الخلية (طبعا الحديث عن خلية حيوانية)
للوصول للـ(DNA) يجب علينا تخطي هذه العوائق التي تحيطه ، نضع مواد كميائية لعمل التالي (المواد تاتي تبعاً للكت من الشركة)
1-تكسير جدار الخلية
2-تحلل البروتينات الموجودة بالخلية

3-بعد ذلك نقوم بعمل غسيل (washing) للعينه مرتين ليكون لدينا (DNA) صافي

طبعا الخطوات اللي اتبعناها والمواد انا ماذكرتها فقط صورة عامة عن مايتم عمله في المختبر

ثانياً تقدير كمية الـ(DNA) الموجود في العينه:ـ

في هذه الخطوة اخذنا العينه لكي نجري اختبار بسيط يبين مدى كثافة العينه والتركيز و جودة العينة.

لماذا تعتبر هذه الخطوة مهمة؟!
توجد بعض المعايير (نسب ثابته) يجب ان لا تتعداها العينة او تقل عنها والسبب (لكي تكون نتائج الـ(PCR) بشكل صحيح)

في هذه الخطوة نستخدم جهاز (spectrophotometar) بطول موجي 260nm الى 280nm
طبعاً راح يكون في معايرة للجهاز و تسجيل الـ(blank) وراح يعطينا النتائج

بعد ما نتاكد ان النتائج في النسب المقبولة نتوجه للـ(pcr)

طبعا عند دراستنا لجين معين نرسل طلباتنا لشركة لعمل الانزيمات الخاصة لكي ترتبط بهذا الجين وتاتي مع الانزيمات درجة الحرارة المثلى لها للارتباط.

الـ(DNA) تاتي المادة بشكل حلزوني ونستخدم انزيم الهيليكيز لجعل المادة الوراثية بشكل خطين متوازية.


متطلبات الـ(PCR)

1- جهاز (PCR)

2. البليمريز : وهو الإنزيم الذي يقوم ببناء وترتيب القواعد النيتروجينية ويجب أن يكون هذا الإنزيم مقاوم للحرارة العالية ليتمكن من العمل.

3. مجموعة متفرقة من القواعد النيتروجينية: ( A T C G ) ليتمكن الإنزيم من ترتيبها في مواقعها أثناء عملية نسخ الحمض النووي (DNA ) .

4. بريمر Primer : وهو قطعة صغيرة من الحمض النووي (DNA ) ليتمكن الإنزيم من بداء البناء و النسخ عليها .

5. والشيء الأهم هو وجود نسخة من الحمض النووي (DNA ) المراد نسخه .

6.بالإضافة إلى محلول أو وسط ليتم به التفاعل : وهذا المحلول يختلف بين تفاعل و أخر .

عملية النسخ :

بعد وضع الحمض النووي المراد نسخة مع البريمر و و إنزيم البوليمريز و مجموعة مع الأحماض النووية هناك 3 مراحل منفصلة تمر بها عملية النسخ:

1. مرحلة التفكيك Denature : رفع الحرارة إلى 94 ْم وذلك لفك الحمض النووي (DNA ) الأصل .

2. مرحلة الالتصاق anneal : إنزال الحرارة إلى ما بين 55-60 ْم ليقوم البريمر بالألتساق فيزيائياً بواسطة الروابط الهيدروجينية مع الحمض النووي (DNA ) الأصل .

3.مرحلة الامتداد extend : ثم يقوم برفع درجة الحرارة إلى 75 ْم ليقوم البلمريز بعمله في بناء الحمض النووي (DNA ) الجديد .

وهذه المراحل الثلاث تعتبر دورة كاملة وفيها يصبح الحمض النووي (DNA ) الأصل قد تضاعف ، وتعتمد كمية ناتج الحمض النووي (DNA ) على عدد الدورات للجهاز .

بعد مانحصل على العينة نستخدم طريقة الـ(gel electrophoresis)

فائدة هذه الطريقة اننا نستطيع فصل الجين المستخلص ومقارنته مع احجام معدة مسبقا في نفس التقنية
الفصل يعتمد على قوة التيار الكهربائي المار بها وعلى حجم العينه
الصورة التالية توضح لكم الصورة العامة لهذه التقنية:ـ


طبعا توضع العينات من الجهة السالبة للجهة الموجبة لماذا؟!
لان المادة الوراثية شحنتها سالبة

فتنطلق نحوا الطرف الموجب وتفصل اجزائها

بعد ذلك نرا النتائج عن طريق الـ(UV) وتقارن ويتم دراستها وهنا قد نقارن النتائج بقواعد البيانات للحصول على اجوبة عن ما نبحث .


هذي صورة عامة جدا لكيفية العمل على الجهاز وعلى التدريب اللي حصلنا عليه اليوم توجهت للمكتبة المركزية وكتبت هذا التقرير العام عشان ما افقد اي معلومة تكون قيمة للصورة العامة

اتمنى اكون افدتكم اي سؤال ارحب به واي انتقاد ارحب به (*_^)



تحية طيبة مني لكم
أخوكم /ولد 02 مكة